行为今世分子生物试验工夫的根蒂，分子克隆工夫正在多个界限都有普及的利用，从基因调治到植物育种，能够说，它撑起了生物界限。

　　此中，无缝克隆工夫是依赖于同源序列的基因克隆工夫，拥有容易、迅速、高效的特色。通过重组酶的功用，或许将恣意含有载体末了重叠区域的 DNA 片断重组至线性化载体上太阳诚娱乐，不受酶切位点节造，载体自连靠山极低。

　　非论是守旧的酶切毗邻克隆形式依旧无缝克隆这类新工夫，假若要做基因表达和敲除，依然逃避不了克隆基因片断这个方法，打好干系的根蒂，掌管此中国理材干正在各类情状浮现时实时掌管并圆活利用。

　　而正在这时间，SnapGene 无疑是通盘从事干系研讨管事家的巨大帮力。只须掌管了 SnapGene，不只能让你正在修建质粒时无往倒霉太阳诚娱乐，更能让你对各类克隆道理一目明白！

　　SnapGene 软件的降生是一名细胞生物学家的无奈之举。他察觉因为克隆经过记载不完全，研讨职员会蹧跶大宗的元气心灵来避免舛讹，为懂得决这个题目，他搜集了一批科学家，软件工程师和产物开荒职员研发出了这款软件。

　　SnapGene 包罗了序列编纂和象征、质粒图谱修建、酶切位点阐明、序列比对等多种成效，因为成效巨大也被称为「分子生物学界的瑞士军刀」。

　　这里学霸君演示的软件版本为 SnapGene 7.2.1（Mac）。分别版天职别体例下的软件页面相差不大，均可实用。

　　「操作」选项中有一系列用于实践试验前模仿试验的东西，每个都有预拣选的默认选项，以及自界说反响的选项，以满意所需操作条件。

　　「东西」选项中有一系列利用 BLAST 琼脂糖凝胶或序列比对来阐明序列和验证结果的东西。

　　关于解说东西，请访谒东西栏中的「酶」、「性情」或「引物」选项，每个选项都有创筑、编纂和显示每种解说所需的东西太阳诚娱乐。

　　侧东西栏从上至下顺序是：显示酶切位点工具、显示解说的成效片断、显示引物、识别可翻译的片断、显示色彩、正在 DNA 链上显示成效片断、显示成效片断的名称、显示地点太阳诚娱乐、显示限行质粒图谱、测序结果序列比照太阳诚娱乐。

　　最先需求绸缪表达载体序列与宗旨基因序列。（能够从 NCBI、文件等举行查找）

　　正在此，学霸君以大肠杆菌卵白表达载体 pet28a 和宗旨基因序列 hyg 为例：

　　按照试验将利用的无缝克隆试剂以及工夫拣选相应的选项，以 In-Fusion 为例。

　　光标放正在载体的 MCS（多克隆位点）处，拣选页面最下面一排的「Sequence」显示核苷酸序列以容易拖选（要戒备酶切位点是否显示哦，假若光溜溜的就要按一下「侧东西栏」中第一个选项）太阳诚娱乐。

　　最好担保拣选的两个酶切位点正在载体上不要相邻，如若必需如斯则正在切载体时先切割对回护碱基条件高的位点，再切另一个位点，云云能够抬高酶切效能。

　　选中需求切除的片断后，点击上方的第二个选项卡「Fragment」，拣选含有拟插入序列的基因文献，选中需求插入的片断。

　　点击上方第三个选项卡太阳诚娱乐堪称分子生物学界的「瑞士军刀」这款东西分分钟带你成为大佬，拣选 PCR 引物选项，填入退火温度（通常为 60 度）以及 Overlap，并拣选是否保存酶切位点后点击「Choose Primers」。

　　如这个例子里，因为后续试验宗旨是要纯化卵白，则需求将 His 标签与卵白统一。而点开侧东西栏中「显示可翻译片断」后，察觉卵白翻译并没有从 His 起首。

　　很容易，只需将光标点正在需求增添碱基的地方，敲入一个「G」，就能成功将两者一同翻译啦～（不要忘怀引物里也要加上工具，点击该引物即可编纂）。

　　除此以表，还能够搜检一下：软件天生的正反向引物 GC 含量（40%～60%）、尽可以确保引物 3』 端结尾两个碱基是 C 和 G 的组合工具、正向和反向引物的 Tm 值相差正在 5 度以内 ……

　　这些可以都是后续 PCR 以及重组是否能得胜的要害所正在哦。搜检收场后，咱们的引物就打算好咯，送去合成即可。

　　看了上述干货教程，你学会了吗？利用科研软件正在于多搜索，多研讨，不要顾虑堕落。每一次受阻、舛讹都是珍奇的练习资产。有笑趣的同砚能够登录 SnapGene 官网（）下载 SnapGene 软件，或是生物学霸后台复兴「SnapGene」获取下载链接。

　　接待留言分享你的 SnapGene 利用履历哦，也能够告诉咱们你思练习的软件，学霸君也会正在后续送上更多的利用科研东西干货～

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